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　　2、目前，已有多个人类wrn片段以及相关复合物的三维结构获得了解析。在wrn蛋白的n末端是一个核酸外切酶（exonuclease）区域，该结构域使得wrn蛋白与核酸结构相互作用，该wrn蛋白是人类recq解旋酶家族中唯一具有3’-5’核酸外切酶活性的成员。该蛋白还具有一个解旋酶（helicase）结构域，能结合并水解atp，从而在atp的供能下解开双链dna。外切酶和解旋酶区域中间有一个具有转录活性的酸性区域，其右侧有一个高度保守的recq碳末端（rqc）结构域，在稳定结构及识别结合dna方面发挥作用，另外，在c末端有一个核定位信号。wrn蛋白各个结构域示意图如图1中a所示。其中，wrn蛋白解螺旋酶（或atp酶）结构域是wrn解旋酶家族最大、最保守的组成部分，包括两个充当atp依赖的dna转位模块的reca样亚结构域，如图1中b所示。该段结构域也是开发wrn药物的常见作用区域，例如，目前已经出现的商品化抑制剂nsc 617145，是一种wrn解旋酶抑制剂（ic50 = 230 nm），以浓度依赖性方式抑制wrn解旋酶的atp酶活性，但不抑制外切核酸酶活性，它对wrn的选择性优于其它的解旋酶。

　　12、优选的，所述wrn_517-945蛋白小量表达测试，包括步骤：1）将质粒转化dh10bac菌株，涂布到lb琼脂糖平板上，用来进行dh10bactm转化株的蓝白斑筛选，挑取白斑接种于卡纳霉素、庆大霉素、四环素抗性lb培养基中，过夜培养后收集菌液提取杆状病毒质粒并通过聚合酶链式反应鉴定杆状病毒质粒是否插入了目的基因；2）将提取的杆状病毒质粒转染到sf9昆虫细胞扩增病毒p1，收集病毒p1；取病毒p1再次感染sf9昆虫细胞，扩增病毒p2，感染后取sf9昆虫细胞，测试wrn_517-945蛋白是否表达；用病毒p2感染sf9昆虫细胞，感染的sf9昆虫细胞离心收集上清，即为病毒p3，加入胎牛血清到病毒p3中，避光4℃保存，筛选得到wrn_517-945蛋白表达的最佳条件。

　　15、将病毒p3感染sf9昆虫细胞用镍柱-缓冲液a按1g细胞：5 ml缓冲液重悬细胞，冰浴中超声破碎，离心，收集上清；继续用镍柱-缓冲液b和镍柱-缓冲液 c清洗，收集流穿组分，进行第一次镍柱纯化，收集各组分，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，收集目的蛋白；然后加入hrv 3c 蛋白酶进行酶切，酶切体系置于透析袋中在镍柱-缓冲液a中透析过夜，使咪唑浓度降低为20mm以下，离心，收集上清，进行第二次镍柱纯化，镍柱纯化后含wrn517-945蛋白样品用阴离子交换柱-缓冲液a，稀释至nacl终浓度为50mm，阴离子交换柱-缓冲液a平衡柱子后，继续用阴离子交换柱-缓冲液a清洗，收集流穿蛋白，收集各组分，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；收集阴离子交换柱洗脱的wrn 517-945蛋白样品，浓缩，使用分子筛-缓冲液平衡好的分子筛对阴离子交换柱纯化后的wrn 517-945蛋白样品进一步纯化，根据uv值，收集各组分并进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

　　23、2、在本发明对已解析的wrn蛋白结构6yhr进行改造和优化，设计更适合结晶的蛋白片段wrn_517-945。在目的片段的n端进行了融合6×his标签序列和hrv 3c蛋白酶酶切位点的设计，方便在昆虫细胞表达后进行纯化，可以获得高纯度的可溶wrn_517-945蛋白。获得均一目的蛋白后，使用点样机器人通过控制溶剂的种类、浓度和单次移液量，快速高效的实现了多种条件下的蛋白质晶体高通量筛选，培养出了高质量的蛋白晶体，解析出了wrn_517-945和小分子的共晶结构。本发明中表达纯化的蛋白和解析的结构为后续wrn蛋白功能研究，活性测定以及药物设计和研发提供更好的基础。另外，本发明中改造后wrn_517-945蛋白相对原有的wrn_517-1093蛋白更易表达和获取，且蛋白纯度、均一性、稳定性等性质更好；且wrn_517-945培养出的晶体分辨率更高，具有更好的重复性。